Além de oferecer diagnóstico genético para pacientes com doenças neuromusculares (DNM) na América Latina, o Latin-SEQ também impulsionará avanços em pesquisa básica e clínica em várias áreas-chave, incluindo:

1. Estabelecer relações fenótipo-genótipo específicas da região:
   Isso permitirá identificar associações específicas entre as características clínicas dos pacientes e as mutações genéticas em populações latino-americanas, contribuindo assim para um melhor entendimento das variantes genéticas presentes na região.
2. Determinar a prevalência de várias DNM na América Latina:
   Ao avaliar a distribuição de diferentes doenças neuromusculares na região, o Latin-SEQ fornecerá uma visão mais clara do seu impacto, ajudando a planejar estratégias aprimoradas de diagnóstico e tratamento.
3. Identificar variantes fundadoras e/ou específicas de regiões ou grupos étnicos:
   Muitas variantes genéticas podem estar presentes apenas em populações ou áreas geográficas específicas. Identificar essas variantes permitirá rastrear a origem e a propagação de certas mutações em populações específicas, melhorando os testes genéticos e facilitando o desenvolvimento de tratamentos direcionados.
4. Estabelecer um algoritmo de diagnóstico baseado na experiência do Latin-SEQ:
   O projeto aproveitará o conhecimento adquirido por meio da análise genética dos pacientes para criar um protocolo de diagnóstico otimizado para doenças neuromusculares na América Latina, levando em conta as características particulares de suas populações e a infraestrutura disponível.

Com essa abordagem abrangente, o Latin-SEQ não apenas oferecerá soluções de diagnóstico mais precisas, mas também contribuirá significativamente para o conhecimento científico e a melhoria da assistência médica na região.

Além disso, os casos em que a análise de exomas não conseguir identificar variantes causadoras da doença serão submetidos a uma análise genômica mais abrangente, com o objetivo de identificar novos genes candidatos associados a DNM. Nesses casos, o primeiro passo será realizar estudos de segregação em familiares afetados e saudáveis, permitindo observar como as variantes são herdadas dentro da família. Posteriormente, serão realizados estudos funcionais das variantes e/ou genes identificados, implementando várias estratégias experimentais, como ensaios enzimáticos, culturas celulares e, quando necessário, modelos animais para avaliar o impacto biológico das variantes. Essa abordagem multifacetada permitirá não apenas avançar na identificação de novos genes relacionados às DNM, mas também compreender melhor seus mecanismos patogênicos e como afetam o paciente em nível molecular e funcional, contribuindo de forma significativa para o desenvolvimento de futuras estratégias terapêuticas.

As mutações recessivas no gene que codifica a disferlina (DYSF) são responsáveis pela disferlinopatia, um termo que abrange um grupo de distrofias musculares raras. Dois principais fenótipos foram descritos: miopatia de Miyoshi (MMD1) e distrofia muscular de cintura tipo R2 (LGMDR2), que apresentam fraqueza distal e proximal, respectivamente. A análise genética é o padrão-ouro para diagnosticar a disferlinopatia. Um número crescente de doenças genéticas pode agora ser diagnosticado diretamente por testes de DNA, mas a classificação das mutações genéticas como patogênicas apresenta desafios consideráveis. A ausência ou a redução significativa de disferlina, medida por Western blot de monócitos musculares ou sanguíneos, é um indicador diagnóstico confiável da doença. No entanto, a complexidade da técnica limita sua aplicação a laboratórios de diagnóstico especializados.

Demonstramos anteriormente que a disferlina está normalmente presente nos neutrófilos, um subconjunto de células sanguíneas. Nosso laboratório desenvolveu um teste diagnóstico simples que envolve o uso de imunohistoquímica em esfregaços de sangue periférico (PBF) obtidos de uma gota de sangue para detectar a presença de disferlina nessas células e identificar casos de disferlinopatia, em que a disferlina está ausente. Estudos adicionais são necessários para validar o teste como uma triagem preliminar para disferlinopatia e como uma avaliação funcional para variantes de significado incerto (VUS) no gene DYSF.

O projeto Neutrophil Assay Validation (NAV study), financiado pela JAIN Foundation, é um estudo prospectivo em larga escala em uma coorte latino-americana não diagnosticada, combinado com um programa de treinamento para coleta de amostras. Este estudo terá acesso a 200 amostras de indivíduos recrutados no projeto LATIN-SEQ liderado pela Universidade de Newcastle upon Tyne, no Reino Unido. Após a conclusão das sessões de treinamento individual para coleta de amostras e verificação de qualidade, os centros participantes na América Latina coletarão PBFs de participantes não diagnosticados com início de fraqueza muscular na idade adulta. A análise da disferlina nos neutrófilos será realizada no laboratório San Camillo IRCCS. Os resultados serão então comparados ao status genético do DYSF dos participantes quando a interpretação dos resultados do WES ocorrer através do LATIN-SEQ. Uma vez totalmente validado, o teste fornecerá um método mais barato, rápido e simples para avaliar a expressão de disferlina e melhorará a acessibilidade ao diagnóstico de disferlinopatia.

A Dra. Rita Barresi é Bióloga Consultora, Chefe do Laboratório de Neurobiologia e Coordenadora Institucional da linha de pesquisa em Biomarcadores Diagnósticos e Prognósticos no Hospital San Camillo IRCCS em Veneza (Itália). Rita completou sua graduação em Biologia na Universidade de Milão e trabalhou como pesquisadora de pós-doutorado no laboratório do Dr. Kevin Campbell no Instituto Médico Howard Hughes da Universidade de Iowa, em Iowa City, Iowa, EUA, estudando distrofias musculares das cinturas (LGMD). Rita foi Coordenadora do Serviço de Alta Especialização para LGMD e Chefe do Laboratório da Unidade de Imunoanálise Muscular em Newcastle de 2008 a 2020.

Rita possui vasta experiência em pesquisa translacional e básica sobre os mecanismos biomoleculares subjacentes às doenças musculares genéticas. Sua pesquisa atual se concentra no desenvolvimento de ferramentas inovadoras para identificar biomarcadores relevantes de doenças neuromusculares e neurodegenerativas, visando orientar e apoiar a jornada dos pacientes, desde o diagnóstico até as opções de tratamento.

Além do componente diagnóstico, o consórcio Latin-SEQ promoverá ativamente projetos de pesquisa tanto na área clínica quanto na genética. Esses projetos poderão incluir, entre outros temas, análises de correlação fenótipo-genótipo, descrição de variantes fundadoras, identificação de novos genes e estudo de fatores genéticos específicos da região. Cada centro participante terá a liberdade de utilizar os resultados gerados conforme seus próprios interesses e objetivos.

O consórcio também incentivará a participação de seus membros em congressos e na publicação de artigos científicos. Para garantir uma participação justa e equilibrada nessas atividades, será aplicada uma política de publicações, que pode ser consultada na seção de intranet deste site ou solicitada diretamente a nós.

Nesta mesma seção de intranet, estará disponível uma lista atualizada de todos os projetos, publicações e apresentações realizadas. Para manter a lista precisa e acessível a todos os membros do consórcio, pedimos que cada participante nos informe sobre novas iniciativas e contribuições.